Το ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου χρησιμοποιείται για την απομόνωση του RNA επειδή ελαχιστοποιεί την βασική υδρόλυση των κλώνων RNA. Αυτό καθιστά ένα σημαντικό βήμα στον καθαρισμό του mRNA κατά τη διάρκεια της γονιδιακής έρευνας ή για τη μελέτη της μεταγραφής.
Τα ρυθμιστικά με βάση κιτρικό άλας μπορούν επίσης να βοηθήσουν στην ανίχνευση αντιγόνων σε παρασκευάσματα σταθερού ιστού επειδή διασπούν τις εγκάρσιες συνδέσεις που σχηματίζονται μεταξύ των αντιγόνων και των μέσων σταθεροποίησης.
Με τον παρακάτω οδηγό, κάντε ένα ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου pH 6. Οι οδηγίες δεν είναι μόνο εύκολες αλλά και γρήγορες για την εκτέλεση. Θα πρέπει να σας διαρκέσει περίπου 10 λεπτά για να ολοκληρώσετε αυτά τα βήματα.
Δύο επιλογές για τη δημιουργία του buffer
Υπάρχουν δύο τρόποι για να φτιάξετε ένα ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου. Κατ 'αρχάς, καθορίστε αν έχετε και το κιτρικό οξύ και τη βάση συζυγούς, κιτρικό νάτριο, για να εργαστείτε με. Αν έχετε μόνο κιτρικό οξύ, δεν είναι πρόβλημα. Μπορείτε ακόμα να κάνετε το buffer.
Από την άλλη πλευρά, εάν έχετε τόσο το οξύ όσο και τη βάση, δημιουργήστε ένα απόθεμα διαλύματος από το καθένα. Αναμείξτε 21 γραμμάρια κιτρικού οξέος σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού και 29,4 γραμμάρια κιτρικού νατρίου σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού.
Αν έχετε μόνο κιτρικό οξύ, αναμείξτε 2,1 γραμμάρια σε λίγο λιγότερο από 1 λίτρο απεσταγμένου νερού και προχωρήστε στο επόμενο βήμα.
Ανάμιξη κιτρικού οξέος και διαλύματα κιτρικού νατρίου
Τώρα που δημιουργήσατε το αποθεματικό σας διάλυμα (εάν είχατε τόσο οξύ όσο και βάση) ή αναμίξατε το οξύ σας με απεσταγμένο νερό (αν δεν το έχετε), μπορείτε να εστιάσετε στις λύσεις σας.
Αναμίξτε 82 χιλιοστόλιτρα διαλύματος κιτρικού οξέος με 18 χιλιοστόλιτρα διαλύματος κιτρικού νατρίου.
Στη συνέχεια, ο συνολικός όγκος του μείγματος να φτάνει μόλις κάτω από 1 λίτρο με απεσταγμένο νερό. Αφήστε αρκετό όγκο για να επιτρέψετε την προσθήκη υδροξειδίου του νατρίου (NaOH) στο επόμενο βήμα.
Ρύθμιση του pH
Ενώ αναδεύεται ήπια το διάλυμα με τη χρήση μαγνητικού αναδευτήρα, χρησιμοποιήστε 1Μ υδροξείδιο του νατρίου για να ρυθμίσετε το pH του μίγματος στο 6,0. Στη συνέχεια, ο τελικός όγκος του διαλύματος φτάνει μέχρι 1 λίτρο με αποσταγμένο νερό, χρησιμοποιώντας ογκομετρική φιάλη.
Τι χρειάζεστε για να κάνετε το buffer
Όχι μόνο δεν θα σας πάρει πολύ χρόνο για να κάνετε το ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου, δεν θα χρειαστείτε επίσης πολλά υλικά γι 'αυτό. Με κιτρικό οξύ, 1Μ υδροξείδιο του νατρίου, αποσταγμένο νερό και βαθμονομημένο ανιχνευτή pH, θα βρίσκεστε στα μισά του δρόμου. Η χρήση κιτρικού νατρίου είναι προαιρετική.
Για τη δημιουργία του buffer θα χρειαστεί επίσης ένας βαθμονομημένος κύλινδρος 1 λίτρου, μια ογκομετρική φιάλη 1 λίτρου και τρία μπουκάλια μέσου 1 λίτρου. Τέλος, θα χρειαστείτε μαγνητική ράβδο ανάδευσης και μαγνητικό αναδευτήρα.
Αν δεν έχετε όλα αυτά τα υλικά, σκεφτείτε να χρησιμοποιήσετε το εργαστήριο στο σχολείο ή στο χώρο εργασίας σας, οπότε δεν χρειάζεται να τα αγοράσετε μόνοι σας. Μπορείτε επίσης να αγοράσετε εύκολα αυτά τα υλικά online ή να επισκεφθείτε ένα κατάστημα ειδικών ειδών στην περιοχή σας.